實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允?/span>DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：登革熱病毒Ⅱ型熒光PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：詳見說明
產(chǎn)品貨號：FS-P64470

產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。

產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?/span>10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

NGB 大鼠腦紅蛋白ELISA檢測試劑盒  NGB ELISA Kit

GR 大鼠糖皮質(zhì)類固醇受體ELISA檢測試劑盒  GR ELISA Kit

ON 大鼠骨粘連蛋白ELISA檢測試劑盒  ON ELISA Kit

FFA 大鼠游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒  FFA ELISA Kit

FE 大鼠鐵蛋白ELISA檢測試劑盒  FE ELISA Kit

ASMA 大鼠抗平滑肌抗體ELISA檢測試劑盒  ASMA ELISA Kit

Kim-1 大鼠腎損傷分子1ELISA檢測試劑盒  Kim-1 ELISA Kit

ICA 大鼠胰島細胞抗體ELISA檢測試劑盒  ICA ELISA Kit

OPGL 大鼠骨保護素配體ELISA檢測試劑盒  OPGL ELISA Kit

Col Ⅳ 大鼠Ⅳ型膠原ELISA檢測試劑盒  Col ELISA Kit

登革熱病毒Ⅱ型熒光PCR檢測試劑盒Annexin IV  膜粘連蛋白 A4抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-DOK1(Tyr362)  磷酸化D酪激衰減蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

PSCDBP/CYTIP  胞粘蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-TUBB3(Ser172)  磷酸化神經(jīng)細胞特異性微管蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Omgp  少突細胞髓磷脂糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

SERINC3  絲合并蛋白3抗體（瘤差異表達蛋白） 規(guī)格: 0.2ml

MYLK3  肌球蛋白輕鏈激3抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Bovine IgG  羊抗牛IgG 規(guī)格: 1mg

VAMP-3  囊泡相關膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlC9orf174  9號染色體開放閱讀框174抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-PBK/TOPK(Thr9)  磷酸化PDZ連接激/T-LAK細胞源蛋白激抗體 規(guī)格: 0.1mlEphA7/Eph receptor A7  酪蛋白激受體A7抗體 規(guī)格: 0.2ml

NIT1  水解1抗體 規(guī)格: 0.2mlFAM61B/LSM14B  FAM61B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-rat IgG  小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 1mgRCBTB1/CLLD7  核苷酸交換因子抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PTPN7(Ser93)  磷酸化非受體型蛋白酪磷酸7抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-c-Kit(Tyr703)  磷酸化原基因c-kit抗體 規(guī)格: 0.1ml