貼壁細胞傳代培養(yǎng)具體過程：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

4 . 收到細胞后首 次傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行。

5.貼壁細胞的生長必須仔細監(jiān)測以確保細胞保持健康。根據(jù)細胞類型，很多貼壁細胞在其達到70-90%密度，也就是覆蓋了培養(yǎng)容器表面的70-90%時需要傳代。

這些細胞系雖然保留了原細胞源的很多特征，但是每次傳代也會使它們開始產生一些擴增細胞的特有特性。因此，對任何一個特定細胞系，要考慮限制傳代的次數(shù)。

6.很多貼壁細胞系可天然附著于無涂層的塑料上。因此，塑料細胞培養(yǎng)板如培養(yǎng)皿或六孔板經常用于傳代細胞。塑料的細胞培養(yǎng)瓶也經常用到，如T25的細胞培養(yǎng)瓶，常用于擴增培養(yǎng)數(shù)目少的細胞或者開始培養(yǎng)生長緩慢的細胞系。T75細胞培養(yǎng)瓶常用在培養(yǎng)擴增速度較快的細胞系或用于生長超過T25培養(yǎng)瓶容量的大量細胞。

7.在轉移貼壁細胞時，要先剪切掉細胞上與和塑料結合的蛋白。因此，消化酶胰酶常用于消化細胞。控制胰酶消化的時間很重要，因為如果處理時間過長會損壞細胞表面的蛋白。

8.細胞培養(yǎng)液能中和胰酶。所以在胰酶消化前常用磷酸緩沖液或PBS洗滌細胞。EDTA，一種鈣螯合劑有時候也用于提高胰酶的蛋白水解功能。

9.為擴增細胞克隆，將新鮮傳代的細胞培養(yǎng)于細胞培養(yǎng)箱中，選擇適合該細胞生長條件，通常為溫度37度，二氧化碳5％和濕度95%