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生化試劑，標(biāo)準(zhǔn)品,對照品，PCR試劑盒，?核酸檢測試劑盒，熒光定量檢測試劑盒，生化試劑盒?，比色法試劑盒，酶活性檢測試劑盒，ELISA試劑盒，酶聯(lián)免yi檢測試劑盒，試劑盒，ELISA試劑盒，抗體，重組蛋白，分光光度法檢測試劑盒，細(xì)胞株，原代細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基，標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
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高香草酸試劑盒操作流程的介紹
日期：2024-09-20 11:57
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摘要：
高香草酸試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中高香草酸(HVA)水平。用純化的高香草酸(HVA)抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入高香草酸(HVA)，再與HRP標(biāo)記的高香草酸(HVA)抗原結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的高香草酸(HVA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中高香草酸(HVA)濃度。
高香草酸試劑盒操作流程如下：
1.待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
2.酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
3.洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4.陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl?！?/div>
5.酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min?！?/div>
6.洗板，同4?！?/div>
7.每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8.酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min?！?/div>
9.洗板，同4?！?/div>
10.每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min?！?/div>
11.每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)?！?/div>
12.分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13.數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本s和陰性對照n的od值后，計算s/n值。s/n***2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。